Тел/факс:(495) 380-00-80
Наша продукция

Определение биолимуса А9 в крови человека с использованием жидкостной хроматографии/ тандемной масс-спектрометрии


Разработка и оценка полуавтоматизированного высокочувствительного количественного определения модифицированного рапамицина биолимус А9 в крови человека с использованием жидкостной хроматографии/ тандемной масс-спектрометрии

Перевод Мазин П. В. (Отдел «Кардиохирургия», ООО «МК»).

Ранее на нашем сайте мы рассказывали о некоторых инновационных подходах в клинической биохимии, о протеомно-метаболомном анализе биологических жидкостей и материалов (ссылка на статью http://www.medicalcompany.ru/proteomno-metabolomnyy_analiz_v_med). В частности, обсуждались  bottom-up («восходящие») методики, методологической основой которых является жидкостная хроматография и тандемная масс-спектрометрия с помощью ионной ловушки/ спрей-ионизации (LCMS). Данные технологии не только находят все большее применение в лабораторной диагностике различных заболеваний, в том числе сердечно-сосудистых. Предпринимаются успешные попытки использовать жидкостную хроматографию и тандемную масс-спектрометрию для контроля результативности интервенционного лечения, а так же для прогнозирования отсроченных осложнений после тех или иных вмешательств.

Стенты с лекарственным покрытием (Drug-eluting stents, DES) все более широко используются для лечения заболеваний коронарных артерий. Имплантация таких стентов обладает признаками самого прогрессивного интервенционного метода современности для коррекции ишемической болезни сердца (ИБС), однако и для него есть свои ограничения и специфические осложнения. Действующее вещество высвобождается из покрытия стента в течение недель/ месяцев, и важно контролировать концентрации фармагента в крови по мере этого высвобождения, продолжать исследовать фармакокинетику и фармакодинамику лекарственной субстанции даже в IV фазе клинического внедрения.

Ученые из Центра анестезиологии Денверского Университета (Колорадо, США) совместно с Калифорнийским отделением Biosensors International апробировали методику полуавтоматической квантификации соединения Biolimus A9 (C55H87NO14, молекулярный вес 986.29 Da) в человеческой крови с помощью LCMS. Приложение оказалось результативным как при начальных оценках концентраций биолимуса после внутривенных инъекций, так и при длительном мониторинге содержания этого вещества после установки соответствующего DES.

 

 

Пространственная структура биолимуса А9 и зотаролимуса

Отличительной особенностью нового метода является высокая степень автоматизации: единственным «ручным» этапом было добавление раствора для преципитации протеинов (сульфат цинка с метанолом) в образец с обработкой в вортексе (5 мин.) и центрифугированием (4°C, 13000 g, 10 мин.), после чего проводили инжекцию и экстракцию в режиме online.

Конфигурация использованного оборудования:

-          жидкостный хроматограф с масс-спектрометром и системой online-экстракции, с двумя бинарными помпами, двумя вакуумными дегазаторами, термостатируемым аутосэмплером и термостатируемыми колонками в комбинации с аутосэмплером и интегрированным 6-разъемным клапаном Rheodyne.

-          Трехфазный квадрупольный масс-спектрометр в качестве детектлора, программный пакет Analyst.

Операционные характеристики процесса: рабочий диапазон - 0.01 - 100 ng/mL (r2>0.99); без ионной супрессии и матрикс-интерференции; стабильность экстрагированных образцов в аутосемплере не менее 24 часов при температуре  +4°C и трех циклах заморозки/ разморозки; минимальный уровень детекции биолимуса - 333 fg/mL; минимальный уровень оценки концентрации биолимуса - 10 pg/mL. Достигнута существенная чувствительность и точность теста для поставленной задачи.  

Ионная хроматограмма образца крови в рамках клинического исследования. 45 минут после установки стента с биолимусом А9. Концентрация лекарственного в-ва в крови - 0,12 нг/ мл. Ось ординат - интенсивность (замеры в секунду).

 

 


 

Источник: C. Clavijo, T. Strom, V. Moll, R Betts et al. Development and Validation of A Semi-Automated Assay for the Highly Sensitive Quantification of Biolimus A9 in Human Whole Blood Using High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry. J. Chromatogr. B. Analyt. Technol. Biomed. Life Sci. 2009, November 1, 877(29), p. 3506-3514


Яндекс.Метрика

121108, Россия, г. Москва, ул. Ивана Франко, дом 4, корпус 1, к. 45.
Телефон: (495) 380-00-80
Факс: (495) 780-31-11
E-mail: info@medicalcompany.ru

Схема проезда...

© 2008 - МЕДИЦИНСКАЯ КОМПАНИЯ